中文名稱：RHA與EWS-FLI1結(jié)合抑制劑（YK-4-279）

英文名稱：YK-4-279

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號(hào)：BJ-01X8097

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細(xì)胞處理：

1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞培養(yǎng)方法：

1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

人 TCTN1 基因全長ORF克隆人前列腺素D2(PGD2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 OTOR 基因全長ORF克隆人前列腺素A1(PGA1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PCDHGB7 基因全長ORF克隆人前列環(huán)素(PGI2)免疫試劑盒*直銷

人 PCDHGA1 基因全長ORF克隆人前顆粒蛋白(PGRN)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 PCDHGA3 基因全長ORF克隆人前膠原C內(nèi)肽增強(qiáng)子1(PCOLCE1)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 PCDHGB3 基因全長ORF克隆人前膠原C端肽(PCP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PCDHGA10 基因全長ORF克隆人前動(dòng)力蛋白1(PROK1/EG-VEGF)免疫試劑盒*直銷

人 PCDHGC4 基因全長ORF克隆人前病毒整合位點(diǎn)1(Pim1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 TMEM134 基因全長ORF克隆人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4(GLUT4)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 AJAP1 基因全長ORF克隆人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(GLUT3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 PCDHGA2 基因全長ORF克隆人葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(GLUT1)免疫試劑盒*直銷

RHA與EWS-FLI1結(jié)合抑制劑（YK-4-279）IKKε和TBK-1雙重抑制劑(MRT67307)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  MRT6730750次 玻璃珠法柱式真菌DNAout Glassbeads Column Fungal DNAOUT 常溫

PDE4抑制劑(Apremilast)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  Apremilast2 ug pET-21b(+) pET-21b(+) 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

PD-1/PD-L1蛋白/蛋白相互作用抑制劑  1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg  PD1-PDL1 inhibitor 11 管 MDS 42recA trfA大腸桿菌  

COX-2抑制劑(Acetaminophen)  1mL(10mM)|500mg|5g|10g  Acetaminophen1g  D3 Vitamin D3 室溫干燥避光保存

p38α抑制劑(Doramapimod)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|200mg  Doramapimod50T 轉(zhuǎn)基因植物PRSV基因PCR檢測試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

COX1和COX2抑制劑(Indomethacin)  1mL(10mM)|1g|5g  Indomethacin100次 肽過氧化物檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存

JAK1抑制劑(Upadacitinib)  1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg  Upadacitinib250mL Maleate Buffer（馬來酸緩沖液）,0.2M,pH5.5  Maleate Buffer,0.2M,pH5.5  常溫保存

CXCL8受體CXCR1/2變構(gòu)抑制劑  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  Reparixin L-lysine salt25OD m7G(5′)ppp(5′)A 帽結(jié)構(gòu)類似物 RNA Cap Structure Analogs -20℃保存

NS3/4A蛋白酶抑制劑（Paritaprevir）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  Paritaprevir2 ug pLVX-EF1α-IRES-mCherry pLVX-EF1α-IRES-mCherry 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

半乳凝素-3抑制劑(TD139)  1mg|5mg|10mg|50mg|100mg  TD139測定培養(yǎng)基 Folic Acid Assay Medium 250g

JNK1/JNK2/JNK3抑制劑(CC-930)  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg  CC-9301瓶 PATU-8988細(xì)胞株 PATU-8988 低溫運(yùn)輸和保存

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)