培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細介紹：

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實驗要點及說明：

1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；

4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。

5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。

瓜子金皂苷己

英文名：   Polygalasaponin F

CAS登錄號：   882664-74-6

分子式：   C53H86O23

分子量：   1090.24

柳穿魚黃素

英文別名：   5,7-dihydroxy-6-methoxy-2-(4-methoxyphenyl)-4-benzopyrone

CAS登錄號：   520-12-7

分子式：   C17H14O6

分子量：   314.29

7-乙氧基莫諾苷

英文名：   7-O-ethyl-morroniside

CAS登錄號：   新品待定

分子式：   C21H34O11

分子量：   462.49

山茱萸新苷I

英文名：   Cornuside I

英文別名：   Methyl (2R,3S,4R)-3-ethenyl-4-[2-(3,4,5-trihydroxybenzoyl)oxyethyl]-2-[(2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,4-dihydro-2H-pyran-5-carboxylate

CAS登錄號：   131189-57-6

分子式：   C34H50O20

去乙酰基車葉草苷酸

英文別名：   (1S,4aS,5S,7aS)-1-(b-D-Glucopyranosyloxy)-1,4a,5,7a-tetrahydro-5-hydroxy-7-(hydroxymethyl)cyclopenta[c]pyran-4-carboxylic acid

CAS登錄號：   14259-55-3

分子式：   C16H22O11

分子量：   390.34

鞣花酸

英文名：   Ellagic acid

英文別名：   （4,3-cde）(1)benzopyran-5,10-dione,2,3,7,8-tetrahydroxy-(1)benzopyrano

CAS登錄號：   476-66-4

分子式：   C14H6O8

酯蟾毒配基

英文名：   Resibufogenin

英文別名：   14,15-beta-epoxy-3-beta-hydroxy-5-beta-bufa-20,22-dienolide

CAS登錄號：   465-39-4

分子式：   C24H32O4

華蟾毒精

英文名：   Cinobufagin

英文別名：   16-beta)-bet;22-dienolide,16-(acetyloxy)-14,15-epoxy-3-hydroxy-,(3-beta,5-beta,15-bufa-2

CAS登錄號：   470-37-1

分子式：   C26H34O6

二十八烷醇

英文名：   Octacosanol

英文別名：   1-Octacosanol, n-Octacosanol

CAS登錄號：   557-61-9

分子式：   C28H58O

1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖

英文別名：   1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose

CAS登錄號：   14937-32-7

分子式：   C41H32O26

分子量：   940.68

小檗胺

英文別名：   (4aS,16aR)-3,4,4a,5,16a,17,18,19-Octahydro-21,22,26-trimethoxy-4,17-dimethyl-16H-1,24:6,9-dietheno-11,15-metheno-2H-pyrido[2',3':17,18][1,11]dioxacycloicosino[2,3,4-ij]isoquinoline-12-ol

CAS登錄號：   478-61-5

分子式：   C37H40N2O6

分子量：   608.72

Aurora抑制劑(PF-03814735)細胞衰老β-半乳糖苷酶染色試劑盒  >100次  Senescence β-Galactosidase Staining Kit2 ug pcDNA3.1（+）/GFP Hsp70 pcDNA3.1（+）/GFP Hsp70 低溫運輸，-20℃保存

溶酶體β-半乳糖苷酶染色試劑盒  >100次  Lysosomal β-Galactosidase Staining Kit馬鈴薯葡萄糖瓊脂（含） Potato Dextrose Agar（Chloramphenicol） 250

細胞膜紅色熒光探針(DiI)  10mg  DiIC18(3)50g D-  D-Pantothenic Acid Hemicalcium Salt 4℃避光保存

細胞膜綠色熒光探針(DiO)  10mg  DiOC18(3)氣單胞菌培養(yǎng)基基礎 Aeromonas Medium Base(Ryan) 250g

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紅色熒光探針  20μl  Endoplasmic Reticulum Tracker Red5mL 支氣道上皮細胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存

高爾基體紅色熒光探針  1mg  Golgi Body Tracker Red100mL Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   Bicine Buffer，0.5M,pH9.0   常溫保存

溶酶體紅色熒光探針  50μl  Lysosome Tracker Red50次 DNA電泳分子量標準(φX174 DNA/Hinc Ⅱ) DNAMETER（3） 4℃保存

線粒體綠色熒光探針  50μg  Mitochondria Tracker Green2 ug pGEX-4T-1-DsRed2 pGEX-4T-1-DsRed2 低溫運輸，-20℃保存

伊紅染色液  100ml  Eosin Staining Solution豬支原體培養(yǎng)基 Pig Mycoplasma Base 250g

中性紅染色液(活細胞染色用)  100ml  Neutral Red Staining Solution(Living cell staining)1瓶 GLC-82 [GLC82]細胞株 GLC-82 [GLC82] 低溫運輸和保存

瑞氏染液  250ml  Bolton肉湯添加劑 Bolton Broth Supplement 1ml/支*5