服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 痘苗病毒LAMP試劑盒圖片 | Vaccinia virus lamp Kit | BJ-P988764 |
它具有下列特點(diǎn): 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 枝孢屬Bacillus cereus 亞熱帶鏈霉菌Bacillus cereus 彎梗根霉Alcanivorax dieselolei 淺黃隱球酵母Ruegeria sp. 減蛋綜合征病毒Halomonas sp. Brenneria salicisBacillus cereus 中華諾爾氏菌Brevundimonas bullata 釀酒酵母Halomonas alimentaria 多孢克魯維酵母Halomonas denitrificans 禾赤鐮孢Halomonas alimentaria 中國漢納酵母Halomonas denitrificans 葡萄座腔菌Halomonas denitrificans 云芝Vibrio parahaemolyticus 水研處硝酸鹽還原菌Vibrio parahaemolyticus 柳樹漆斑病Vibrio parahaemolyticus 栗疫菌Planococcus citreus 孟氏假單胞菌Planococcus citreus 痘苗病毒LAMP試劑盒圖片IL-17C 白介素-17C抗體荊芥穗2-溴-5-氟芐Human MMP-17 (Matrix Metalloproteinase 17) ELISA Kit IL-17D/IL-27 白介素-17D抗體漆姑草2-溴-5-氟芐Human MMP-24 (Matrix Metalloproteinase 24) ELISA Kit IL-17E/IL-25 白介素-17E抗體桑枝2-溴-4-氟-6-胺Human MMP-7 (Matrix Metalloproteinase 7) ELISA Kit IL-17F/IL-24 白介素-17F抗體黑種草子2-溴-4-氟-6-胺Human MMP-8 (Matrix Metalloproteinase 8) ELISA Kit IL-27R/TCCR 白細(xì)胞介素27受體抗體紫花地丁3-溴-5-氟甲苯Human MMP-9 (Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit IL-18/IGIF 白細(xì)胞介素-18/干擾素γ誘導(dǎo)因子抗體紫草(新疆紫草)3-溴-5-氟甲苯Human ELA2B (Elastase 2B) ELISA Kit IL-20 白細(xì)胞介素-20抗體石榴子4-芐氧基吲哚Human TIMP-2 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 2) ELISA Kit IL-23 白介素-23抗體貝母花4-芐氧基吲哚Human TIMP-3 (Tissue Inhibitors of Metalloproteinase 3) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 |