操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無(wú)菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無(wú)菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 牛附紅細(xì)胞體(牛嗜血支原體)LAMP試劑盒 | Lamp kit for Eperythrozoon bovis | BJ-P987851 |
它具有下列特點(diǎn): 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒(méi)有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對(duì)原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡(jiǎn)便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。 (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲(chǔ)存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 1g釀酒酵母Human ORAI2 ELISA Kit 5g鏈格孢Human OSGIN1 ELISA Kit 25g黃硬皮馬勃Human ORAI3 ELISA Kit 5g毛柄金錢菌(金針菇)Human ORC5L ELISA Kit 5g狂犬病參考疫苗Human ORC4L ELISA Kit 5MG巨型艾美耳球蟲Human OSR1 ELISA Kit 100g中國(guó)臺(tái)灣根霉Human ORC6 ELISA Kit 25g黃赭色鏈霉菌Human OS9 ELISA Kit 1g鴨疫里氏桿菌Human OLFM3 ELISA Kit 250mg膠孢Human OSBP ELISA Kit 5g枯草芽孢桿菌Human OLIG2(Oligodendrocyte transcription factor 2) ELISA Kit 1g耐輻射薄層菌Human OMCG1 ELISA Kit 5g多根硬皮馬勃Human OMA1 ELISA Kit 1g鐮孢霉Human ONECUT2 ELISA Kit 250mgChryseobacterium lathyriHuman ONECUT1 ELISA Kit 5g紅球菌Human OPA3 ELISA Kit 1g高山被孢霉Human OPTN ELISA Kit 牛附紅細(xì)胞體(牛嗜血支原體)LAMP試劑盒Phospho-PDGF Receptor beta (Tyr771) 磷酸化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-B抗體紫云英苷芐基雙(三苯基膦)氯化鈀(Ⅱ)Human EDN (EDNEosinophil-Derived Neurotoxin) ELISA Kit PDI 蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶抗體對(duì)葉百部堿芐基雙(三苯基膦)氯化鈀(Ⅱ)Human TTR (Transthyretin) ELISA Kit PDK1/PDPK1 3磷酸肌依賴性蛋白激酶1抗體仙茅苷3-磺基十六烷基二甲甜菜堿Human TCF20 (Transcription Factor 20) ELISA Kit Phospho-PDK1 (Ser241) 磷酸化3磷酸肌依賴性蛋白激酶1(R型)人參皂苷Rh23-磺基十六烷基二甲甜菜堿Human GAPDH (Glyceraldehyde-3-Phosphate Dehydrogenase) ELISA kit Phospho-PDK1 (Tyr373/376) 磷酸化3磷酸肌依賴性蛋白激酶1抗體白花前胡甲素Chloro[(S)-(-)-2,2'-bis(di-p-tolylphosphino)-1,1'-binaphthyl](p-cymene)ruthenium(II) chloride,[RuCl(p-cymene)((S)-tolbinap)]ClHuman TFR/CD71 (Transferrin Receptor) ELISA Kit Pdk4 酮酸脫氫酶激酶4抗體白花前胡素(S)-(-)-1-BOC-2-吡咯烷甲Human TFR2 (Transferrin Receptor 2) ELISA Kit PDX1 胰十二指腸同源異型盒基因抗體貝母辛(S)-(-)-1-BOC-2-吡咯烷甲Human F-TESTO (Free Testosterone) ELISA Kit PEA3 瘤促活化因子3抗體地奧司明(R)-(+)-1-Boc-2-吡咯烷甲Human TF (Transfer Factor) ELISA Kit |