參數(shù)規(guī)格: 產(chǎn)品名稱:無乳支原體LAMP試劑盒說明書 英文名稱:Lamp kit for Mycoplasma lactis 貨號:BJ-P988271 產(chǎn)品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產(chǎn)品特點: 本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產(chǎn)品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! PCR反應(yīng)五要素: 參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。 設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。 皮膚皮狀新絲孢酵母Anti-GOLT1A Antibody 鞘氨桿菌屬Anti-GORASP2 Antibody 擬枝孢鐮孢Anti-GOSR1 Antibody 尖孢鐮刀菌Anti-GP1BA Antibody GlaciimonasAnti-GOSR2 Antibody 異常漢遜酵母異常變種Anti-GP1BA Antibody 聚生殼菌Anti-GP5 Antibody 三亞布勒擔子酵母Anti-GPAT3 Antibody 桃色青霉Anti-GPAT3 Antibody 玫瑰單胞菌Anti-GPC3 Antibody 棘孢木霉Anti-GPBAR1 Antibody 光黑腹菌Anti-GPC1 Antibody 凍膠假絲酵母Anti-GPC5 Antibody 湖底肉桿菌Anti-GPR1 Antibody 金灰青霉Anti-GPR107 Antibody Acinetobacter preuotii sp.Anti-GPR101 Antibody 門多薩假單胞菌Anti-GPR119 Antibody 無乳支原體LAMP試劑盒說明書C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體2,4-二甲氧基苯甲酰氯Porcine TNKS2 (Tankyrase 2) ELISA Kit γ干擾素誘導(dǎo)單核細胞因子抗體2,4-二甲氧基苯甲酰氯Porcine NPYR2 (Neuropeptide Y Receptor Y2) ELISA Kit 血小板因子4抗體吲哚-4-甲酸甲酯Porcine CDK4 (Cyclin Dependent Kinase 4) ELISA Kit 血小板趨化因子7蛋白抗體吲哚-4-甲酸甲酯Porcine NNE (Non-Neuronal Enolase) ELISA Kit 干擾素誘導(dǎo)T細胞趨化因子抗體吲哚-4-甲酸甲酯Porcine COMP (Cartilage Oligomeric Matrix Protein) ELISA Kit B-淋巴細胞趨化因子抗體N,N-二甲基磺酰胺Porcine BAK1 (Bcl2 Antagonist/Killer 1) ELISA Kit 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體N,N-二甲基磺酰胺Porcine PGF (Placental Growth Factor) ELISA Kit 凋亡加強結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體1-Boc-3-氮雜環(huán)丁酮Porcine SEPP1 (Selenoprotein P) ELISA Kit 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融,否則會導(dǎo)致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團拖尾亮帶,影響實驗結(jié)果。 4. 建議擴增片段長度1 kb以內(nèi),以便擴增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |