它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結果交付——售后服務。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 牛病毒性腹瀉病毒2型RT-LAMP試劑盒圖片 | RT-LAMP kit for bovine viral diarrhea virus type 2 | BJ-P987616 |
? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 1g韓國梅奇酵母Human PTMA(Prothymosin alpha) ELISA Kit 5g金龜子綠僵菌Human DSCR6(Protein ripply3) ELISA Kit 1g短芽胞桿菌Human CYP2C9(Cytochrome P450 2C9) ELISA Kit 1g綠色木霉Human FCGBP(IgGFc-binding protein) ELISA Kit 250mg擴展青霉Human LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) ELISA Kit 100ml姬菇Human HLA-E(HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E) ELISA Kit 25mlHuman PIBF(Progesterone-induced-blocking factor) ELISA Kit 25g衛(wèi)矛Human PYY2(Putative peptide YY-2) ELISA Kit 5g枯草芽孢桿菌Human RPRM(Protein reprimo) ELISA Kit 100ml黃海鞘氨盒菌Human KLHL17(Kelch-like protein 17) ELISA Kit 25ml香菇Human ARHGAP21(Rho GTPase-activating protein 21) ELISA Kit 10g伯頓絲孢畢赤酵母Human FNDC5(Fibronectin type III domain-containing protein 5) ELISA Kit 50g巴斯德畢赤酵母Human ITGAL(Integrin alpha-L) ELISA Kit 25g費氏中華根瘤菌Human CLEC4E(C-type lectin domain family 4 member E) ELISA Kit 5g美澳型核果褐腐病菌Human OR51E2(Olfactory receptor 51E2) ELISA Kit 100g鞘氨單胞菌Human LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) ELISA Kit 25g銀杏盤多毛孢菌Human FCGBP(IgGFc-binding protein) ELISA Kit 牛病毒性腹瀉病毒2型RT-LAMP試劑盒圖片CD226/DNAM-1 CD226抗體芬布芬氘代正辛烷-d18Human PSAP (Prosaposin) ELISA Kit CD229/SLAMF3 CD229抗體曲可蘆丁(S)-(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)Human PTGES (Prostaglandin E Synthase, Microsomal) ELISA Kit Integrin beta 2/CD18/LFA-1 整合素β2抗體二羥茶堿(S)-(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)Human ISG15 (Interferon Stimulated Gene 15) ELISA Kit Phospho-CD18 (Ser756/Thr758/759) 磷酸化整合素β2抗體茜素雙酯3-(Boc-氨基)哌啶Human AIMP1 (Aminoacyl tRNA Synthetase Complex Interacting Multifunctional Protein 1) ELISA Kit CD184/CXC-R4 細胞表面趨化因子受體4抗體苯甲酸3-(Boc-氨基)哌啶Human 11-DH-TXB2 (11-Dehydro-thromboxane B2) ELISA Kit CD19 CD19抗體鹽酸地巴唑2-(二苯基膦基)苯甲酸Human 12-HETE (12-Hydroxyeicosatetraenoic Acid) ELISA Kit Phospho-CD19 (Tyr531) 磷酸化CD19抗體磷酸氯喹2-(二苯基膦基)苯甲酸Human 15-LO (Arachidonate 15-Lipoxygenase) ELISA Kit CD20 CD20抗體鹽酸異N-(3-Hydroxytetradecanoyl)-DL-homoserine lactoneHuman 16-α OHE-1 (16-α Hydroxyestrogen 1) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 |