操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應(yīng)管可以有多個。配制過程中應(yīng)注意無菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 鯉皰疹病毒通用LAMP試劑盒說明書 | Universal lamp kit for carp herpesvirus | BJ-P987767 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點 (1) 特異性強 PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 25g農(nóng)藥速測卡Human SPDYA ELISA Kit 5g大腸埃希氏桿菌Human SP6 ELISA Kit 1g大腸埃希氏菌Human SPANXE ELISA Kit 5g桿狀毛霉Human SPA17 ELISA Kit 100mg雜色曲霉Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) ELISA Kit 100g馬克斯克魯維酵母Human Spartin/SPG20 ELISA Kit 25g鞘氨盒菌屬Human SPACA3 ELISA Kit 5g產(chǎn)氣腸桿菌Human SPAM1 ELISA Kit 25g假單胞菌屬Human SPACA1 ELISA Kit 5g馬闊里類芽孢桿菌Human SPAG11A ELISA Kit 25g球孢白僵菌Human SPANXA2/SPANXA1 ELISA Kit 5g枯草芽孢桿菌Human SPANXB1 ELISA Kit 1g球孢鏈霉菌Human SPANXC ELISA Kit 5g平菇Human SP6 ELISA Kit 25ml玫煙色棒束孢Human SPA17 ELISA Kit 5ml污黑腐皮殼Human SPANXE ELISA Kit 100g熱帶假絲酵母Human Spartin/SPG20 ELISA Kit 鯉皰疹病毒通用LAMP試劑盒說明書Integrin alpha 5/CD49e 整合素α5抗體川射干雙(4-溴苯基)Human SIRPA (Signal Regulatory Protein Alpha) ELISA Kit Integrin alpha V/CD51 整合素αV抗體合歡皮雙(4-溴苯基)Human PTX 3/TSG-14 (Pentraxin 3, Long) ELISA Kit Integrin alpha 6/CD49f 整合素α6抗體草果2-氨基-5-吡啶Human PDGF-AA (Platelet Derived Growth Factor-AA) ELISA Kit Integrin Beta 3/CD61 整合素β3抗體氯霉素2-氨基-5-吡啶Human PDGF-AB (Platelet Derived Growth Factor AB) ELISA Kit JAK1 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體土霉素2-氨基-5-吡啶Human PDGF-BB (Platelet Derived Growth Factor-BB) ELISA Kit Phospho-Jak1 (Tyr1022/1023) 磷酸化蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗體四環(huán)素3-氨基-4-氯吡啶Human PCSK9 (Proprotein Convertase Subtilisin/Kexin Type 9) ELISA Kit JAK2 蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗體紅霉素3-氨基-4-氯吡啶Human RBP4 (Retinol Binding Protein 4, Plasma) ELISA Kit phospho-JAK2(Tyr1007+Tyr1008) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗體鏈霉素十氯聯(lián)苯Human RLN2 (Relaxin-2) ELISA Kit |