PCR反應五要素: 參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物: 引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。 設計引物應遵循以下原則: ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。 ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。 ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3’端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。 ⑤引物3’端的堿基,特別是zui末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。 ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點,被擴增的靶序列zui有適宜的酶切位點,這對酶切分析或分子克隆很有好處。 ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。 參數規(guī)格: 產品名稱:人鼻病毒29LAMP試劑盒說明書 英文名稱:Human rhinovirus 29lamp Kit 貨號:BJ-P988100 產品規(guī)格:50T 分類:熒光定量PCR試劑盒 儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。 運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。 產品特點: 本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。? 產品特點: ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增; ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝; ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測; ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。 樣品要求及注意事項: 1、 如果提供實驗材料,實驗材料必須保證新鮮,請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑,并用干冰運輸。 2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ,也可以將樣品研磨后放在 Trigol中,動植物組織 : 50~100mg/mlTrigol,貼壁細胞:10cm2/mlTrigol,懸浮細胞:5×106動植物,酵母細胞或細菌細胞10×107/mlTrigol。 3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進行評估。 4、 實時熒光定量PCR服務您一定要提供樣品及要擴增基因的詳細信息。 儲存條件: 14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 使用方法: 一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。 1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。 2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。 3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。 6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。 二、樣品 DNA 的制備 7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。 8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。 三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行) 9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。 特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途! 1g短雙歧桿菌Anti-NPC2 Antibody 25g費氏中華根瘤菌Anti-NPC2 Antibody 5g硫磺絢孔菌Anti-NPHS2 Antibody 1g井草螺菌Anti-NPHS1 Antibody 25g紅酵母屬Anti-NPM1 Antibody 5g皺褶莫氏黑粉菌Anti-NPHS2 Antibody 25mg費氏中華根瘤菌Anti-NPM2 Antibody 1g扭曲毛殼Anti-NPHS2 Antibody 25g大腸埃希菌Anti-NPPA Antibody 5g鏈格孢Anti-NPM1 Antibody(原貨號PB0329) 1g糞腸球菌Anti-NPPA Antibody 250mg擬青霉Anti-NPPA Antibody 5g葛藤根瘤菌Anti-NPPB Antibody 10g赭曲霉Anti-NPR1 Antibody 50g枯草芽孢桿菌Anti-NPS Antibody 25g斯氏土地桿菌Anti-NPY1R Antibody 100g毛栓菌Anti-NPY Antibody(原貨號PB0319) 人鼻病毒29LAMP試劑盒說明書Ezrin/Radixin/FITC 熒光素標記埃茲蛋白抗體IgG卷曲螺旋結構域蛋白61抗體5-硝基吲哚啉Rat FIL1d (Interleukin 1Delta) ELISA Kit Phospho-Ezrin (Tyr353) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化埃茲蛋白抗體IgG卷曲螺旋結構域蛋白8抗體3-氯-5-氟苯Rat FIL1h (Interleukin 1 Eta) ELISA Kit Phospho-Ezrin (Thr567) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化埃茲蛋白抗體IgG神經酰胺激酶CERK抗體3-氯-5-氟苯Rat IL-1ra (Interleukin 1 Receptor Antagonist) ELISA Kit Fabp2 /FITC 熒光素標記脂肪酸結合蛋白2抗體IgG細胞分裂周期樣激酶2抗體3,5-二(三氟甲基)苯甲Rat LCAT (Lecithin-Cholesterol Acyltransferase) ELISA Kit FABP(brain)/FITC 熒光素標記腦型脂肪酸結合蛋白抗體IgG細胞分裂周期樣激酶3抗體3,5-二(三氟甲基)苯甲Rat ALD (Aldosterone) ELISA Kit factor V/FITC 熒光素標記凝血因子5抗體IgG17號染色體開放閱讀框49抗體3,5-二(三氟甲基)苯甲Rat IL-2Rα (Interleukin-2 Receptor-α) ELISA Kit factor VIII/FITC 熒光素標記第八因子相關抗原抗體IgG17號染色體開放閱讀框53抗體氧化釕(IV) 水合物Rat IL-3 (Interleukin 3) ELISA Kit factor VIII/FITC 熒光素標記第八因子相關抗原抗體IgG17號染色體開放閱讀框57抗體氧化釕(IV) 水合物Rat FE (Ferritin) ELISA Kit 注意事項: 1. 建議使用新鮮采取的動物組織,若為長期冷凍組織,應盡量避免反復凍融,否則會導致模板的降解,影響PCR效率。 2. 試劑Buffer AL若低溫保存,易產生沉淀。在使用前務必將其在室溫中放置一段時間,也可在37℃水浴中預熱10 min,以溶解沉淀,混勻后再使用。 3. 電泳檢測時,切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則,電泳時會在泳道中出現一大團拖尾亮帶,影響實驗結果。 4. 建議擴增片段長度1 kb以內,以便擴增效率佳。 5. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。 |