操作步驟: 1:樣品準備:取1毫升細胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細胞都可以 已培養(yǎng)48小時以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復用無菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個月。 2:PCR反應的準備: 待各組份融化后先瞬時離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應體系,每次實驗需加一個陰性和一個陽性對照,測試反應管可以有多個。配制過程中應注意無菌,并注意避免操作產生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風壓的設備如超凈臺或生物安全柜中進行操作。建議配制完畢后瞬時離心以使液體沉至管底。 服務流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。 產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 | 人多瘤病毒7LAMP試劑盒 | Human polyomavirus 7lamp Kit | BJ-P988095 |
它具有下列特點: 1. 即開即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經過精心優(yōu)化,專一性強,只擴增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒有交叉反應。 3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應特點 (1) 特異性強 PCR反應的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結合; ②堿基配對原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。 (3) 簡便、快速 PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。 (4) 對標本的純度要求低 不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。 儲存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。 3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實驗方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4:PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μl進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 5g南方散斑殼Anti-NES Antibody 1g瓜類*Anti-Nephrin(NPHS1) Antibody 5g中國臺灣根霉Anti-Neuroglobin(NGB) Antibody 100mg盤長孢狀刺盤孢Anti-NF2(Merlin) Antibody 500mg鐘器腐霉Anti-NF2 Antibody 1g黃曲霉Anti-NFAT5 Antibody 250mg產紫青霉Anti-NF1 Antibody 5g炭黑曲霉Anti-NFATC1 Antibody 250mg噬瓊脂鏈卵菌Anti-NFATC1 Antibody 50mg葡萄座腔菌Anti-NFATC1 Antibody 100g厚白盤革菌Anti-NFATC2 Antibody 25g黑腐皮殼菌Anti-NFATC1 Antibody 5g球孢白僵菌Anti-NFATC2 Antibody 1g皺褶青霉Anti-NFATC3 Antibody 25g枯草芽孢桿菌Anti-NFATC3 Antibody 5g麥芽糖假絲酵母Anti-NFATC4 Antibody 100g大耳霉Anti-NFATC3 Antibody 人多瘤病毒7LAMP試劑盒EphA1 R/FITC 熒光素標記抗EphA1-R受體抗體IgG細胞分裂周期蛋白CDC123抗體苯二乙酯Rat hs-CRP (High Sensitivity C-Reactive Protein) ELISA Kit EphA2 R/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠酪氨酸蛋白激酶受體A2抗體IgG神經細胞蠟樣質脂褐質沉積病蛋白CLN3抗體N-七氟丁?;溥騌at HAT1 (Histone Acetyltransferase 1) ELISA Kit Phospho-EphA2 (Tyr594) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠磷酸化酪氨酸蛋白激酶A2受體抗體IgG趨化素樣因子超家族成員3抗體N-七氟丁酰基咪唑Rat Histon-H2b ELISA Kit EphA4 R/FITC 熒光素標記酪氨酸蛋白激酶受體A4抗體IgG染色質修飾蛋白1B抗體4,7-二甲基-1,10-菲羅啉Rat COL1 (Collagen Type I) ELISA Kit EphA4/FITC 熒光素標記抗酪氨酸蛋白激酶A4抗體IgG冷誘導RNA結合蛋白抗體4,7-二甲基-1,10-菲羅啉Rat HABP1 (Hyaluronan Binding Protein 1) ELISA Kit EphB2 R/FITC 熒光素標記酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體IgG細胞連接相關蛋白1抗體4-氟-4'-羥基聯(lián)苯Rat HIF-1α (Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha) ELISA Kit EphB6R/Eph receptor B6/FITC 熒光素標記酪氨酸蛋白激酶受體B6抗體IgG細胞連接相關蛋白2抗體4-氟-4'-羥基聯(lián)苯Rat IDS (Iduronate Sulfatase) ELISA Kit EPOR/FITC 熒光素標記紅細胞生成素受體抗體IgG磷酸化周期素依賴性激酶5抗體N-乙氧羰基-4-托品酮Rat HMG-CoAR (3-Hydroxy-3-Methylglutaryl Coenzyme A Reductase) ELISA Kit |