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ELISA顯色和比色的方法
點擊次數:1194 更新時間:2015-01-23

ELISA試劑盒對比方法

(1) 顯色 
顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應,此時酶催化無色的底物生成有色的產物。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內,陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。在定量測定中,加入底物后的反應溫度和時間應按規(guī)定力求準確。定性測定的顯色可在室溫進行,時間一般不需要嚴格控制,有時可根據陽性對照孔和陰性對照孔的顯色情況適當縮短或延長反應時間,及時判斷。 
   OPD底物顯色一般在室外溫或37℃反應20-30分鐘后即不再加深,再延長反應時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應應避光進行,顯色反應結束時加入終止液終止反應。OPD產物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉向棕黃色。 
TMB受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應觀察結果。但為保證實驗結果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當時間閱讀結果。TMB經HRP作用后,約40分鐘顯色達,隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應終止。這類終止劑尚能使藍色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍色轉變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。
(2) 比色 
    比色前應先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗,需先將板置于標準96孔的座架中,才可進行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。 
比色時應先以蒸餾水校零點,測讀底物孔(未經任何反應僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔),以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點,以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進行計算。 
比色結果的表達以往通用光密度(oplical density,OD),現按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為"A492nm"或"OD492nm"。

 CCA  小鼠結腸癌抗原  規(guī)格: 48T/96T
 KAF  小鼠角化細胞內分泌因子  規(guī)格: 48T/96T
 GDNF  小鼠膠質細胞系來源的神經營養(yǎng)因子  規(guī)格: 48T/96T
 Collagenase II  小鼠膠原酶II  規(guī)格: 48T/96T
 Collagenase I  小鼠膠原酶I  規(guī)格: 48T/96T
 PCT  小鼠降鈣素原  規(guī)格: 48T/96T
 CGRP  小鼠降鈣素基因相關肽  規(guī)格: 48T/96T
 CT  小鼠降鈣素  規(guī)格: 48T/96T
 ALP  小鼠堿性磷酸酶  規(guī)格: 48T/96T
 bFGF-9  小鼠堿性成纖維細胞生長因子9  規(guī)格: 48T/96T
 bFGF-6  小鼠堿性成纖維細胞生長因子6  規(guī)格: 48T/96T
 bFGF-4  小鼠堿性成纖維細胞生長因子4  規(guī)格: 48T/96T
 bFGF  小鼠堿性成纖維細胞生長因子  規(guī)格: 48T/96T
 TAb  小鼠甲狀腺素抗體  規(guī)格: 48T/96T
 T4  小鼠甲狀腺素  規(guī)格: 48T/96T
 TG  小鼠甲狀腺球蛋白  規(guī)格: 48T/96T
 TPO  小鼠甲狀腺過氧化物酶  規(guī)格: 48T/96T
 PTHrP  小鼠甲狀旁腺激素相關蛋白  規(guī)格: 48T/96T
 PTH  小鼠甲狀旁腺激素  規(guī)格: 48T/96T
 AFP  小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白  規(guī)格: 48T/96T


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