細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。

elisa試劑盒材料：凍存管，離心管，細胞培養(yǎng)用材料，500 mL燒杯，膠布，搪瓷杯，75％酒精棉。

藥品：培養(yǎng)基(RPMI1640或DMEM)，小牛血清，0．25％胰蛋白酶溶液，二甲基亞砜(DMSO)或甘油，0．5％臺盼藍染液，液氮。

儀器：4℃冰箱，-70℃冰箱，液氮容器，微量加樣器，水浴鍋，離心機。

(一)細胞凍存

1．取待凍存的細胞用胰酶消化(見相關實驗細胞傳代培養(yǎng)部分)，用培養(yǎng)基將細胞沖洗下來。800r/min離心5 min，棄上清收集細胞。如果是懸浮生長的細胞，則可直接離心收集細胞。

2．加入適量凍存液(10％甘油+90％培養(yǎng)基，或者10％DMSO+90％培養(yǎng)基)制成細胞懸液。細胞濃度宜大，3×106個／mL左右，并可適量增加牛血清濃度至20％。

3．細胞懸液裝入凍存管中。用膠布封裹，做好標記(寫上細胞種類、時間及凍存條件等)。

4．凍存管在4℃下存放30 min，轉放-20℃ 1.5～2 h，再轉人-70℃ 4-12 h后即可轉移到液氮內(-196℃)，注意進行登記。

(二)細胞復蘇

1．取一搪瓷杯盛上適量自來水加熱至40℃左右。

2．從液氮中取出凍存管立即投人40℃水中迅速解凍。

3．取出凍存管，用75％酒精清潔管口，打開。

4．離心去上清收集細胞，用無血清培養(yǎng)基洗1次，加人3 mL新鮮培養(yǎng)基，于小培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

5．每日觀察細胞生長情況，如果死細胞較多，復蘇次日應換液。待細胞長滿后可進行傳代培養(yǎng)。elisa試劑盒