操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:IAP抑制劑(LCL161) 英文名稱:LCL161 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7135 英文名稱:LCL161 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg LCL161是一種IAP抑制劑,在HEK293細胞中,抑制XIAP活性,IC50為35nM,在MDA-MB-231細胞中,抑制cIAP1活性,IC50為0.4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1005342-46-0 純度:99.17% 分子量:500.63 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 Cladosporium cucumerinum黃瓜黑星病PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Caspase-12 半胱胺酸蛋白蛋白-12抗體 規(guī)格: 0.1ml Vesicular Stomatitis Virus New Jersey Serotype(VSV-NJ)水泡性口炎病毒新澤西型探針法熒光定量RT-PCR劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周DBF4B/ASKL1 S期激活化蛋白DBF4B抗體 規(guī)格: 0.2ml Theileria uilenbergi尤氏泰勒蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Bovine IgM/Cy5 Cy5標記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 0.1ml Cucurbit Yellow Stunting Disorder V(CYSDV)葫蘆黃色矮化失調(diào)病毒PCR試劑盒 植物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-GSK-3 Beta(Ser9) 磷酸化葡萄糖合成激3β抗體 規(guī)格: 0.1ml Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus(HP-PRRSV)高致病豬生殖與呼吸綜合癥病毒美洲型變異株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用) 50次 低溫 負20度 一年 2-4周GABRA5/GABA A Receptor alpha 5 γ1氨基丁酸受體α5/GABRα5抗體 規(guī)格: 0.1ml Aleutian Disease Virus(ADV)阿留申病病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Cyp2-j3 細胞色素P450Ⅱj3抗體 0.2ml Ehrlichia fergusonii弗格森艾利希體(弗格森埃立克體)探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgG/APC APC標記的羊抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml Fructus evodiae吳茱萸探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周NPRC/Natriuretic Peptide Receptor C 利鈉肽受體C抗體 規(guī)格: 0.2ml Equine Rotavirus馬輪狀病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周phospho-REC8(Ser251) 磷酸化減數(shù)分裂重組蛋白家族REC8抗體 規(guī)格: 0.1ml Human Immunodeficiency Virus 2(HIV-2)人免疫缺陷病毒II型B組前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mitofilin/IMMT 線粒體內(nèi)膜蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml IAP抑制劑(LCL161)小鼠8異前列腺素(8-iso-PG)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠嗜酸性粒細胞陽離子蛋白(ECP)免疫試劑盒進口、組裝 山羊血小板衍生生長因子BB(PDGF-BB)免疫試劑盒進口、組裝 大鼠封閉蛋白4(CLDN4)免疫試劑盒進口、分裝 人信號傳導子及轉(zhuǎn)錄激活子5(STAT5)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 蝌蚪γ氨基丁酸(GABA)免疫試劑盒進口、分裝 人葡萄糖6異構(GPI)免疫試劑盒*直銷 LIM培養(yǎng)基 英文名稱:LIM Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g 人抗肌內(nèi)膜抗體(EMA)(IgA)免疫試劑盒進口、組裝 GVPC瓊脂基礎 英文名稱:GVPC Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:100g 人腓骨蛋白2(FBLN2)免疫試劑盒進口、分裝
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