操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:ITPKA抑制劑(BAMB-4) 英文名稱:BAMB-4 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X8378 BAMB-4(ITPKA-IN-C14)是新型的膜滲透型ITPKA抑制劑,在ADP-Glo實驗中IC50為37uM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :891025-25-5 別名:ITPKA-IN-C14 純度:99.99% 分子量:252.27 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備: 1) 準備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 小鼠 PTMA 基因全長ORF克隆大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠 DPT 基因全長ORF克隆大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 ENTPD3 基因全長ORF克隆大鼠腦紅蛋白(NGB)免疫試劑盒*直銷 小鼠 LTA4H 基因全長ORF克隆大鼠腦啡肽(ENK)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠 CLEC6A / CLEC4N / Dectin-2 基因全長ORF克隆大鼠腦腸肽(BGP/Gehrelin)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠 S100A1 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)脂素(visfatin)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 FKBP1A / FKBP12 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白抑制劑(vaspin)免疫試劑盒*直銷 小鼠 FAM19A1 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素(GC)免疫試劑盒進口、組裝 小鼠 DR6 / TNFRSF21 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)皮脂肪(EL)免疫試劑盒進口、分裝 小鼠 ATF2 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)皮抑素(ES)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 小鼠 CD155 / PVR 基因全長ORF克隆大鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS/NOS3)免疫試劑盒*直銷 ITPKA抑制劑(BAMB-4)2 ug pBAD His C-LacZ pBAD His C-LacZ 低溫運輸,-20℃保存 100mL 白細胞裂解液 White Cell Lysis Solution 4℃保存 2 ug pDsRed-N1 pDsRed-N1 低溫運輸,-20℃保存 哥倫比亞培養(yǎng)基 Columbia Medium 250g 25g L- L-Tyrosine 室溫避光保存 50T 乙型脊髓灰質(zhì)炎病毒PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存 200 mL 小鼠單核細胞分離液1.090 Cell Separation Solution -20℃保存 250mL HEPES Buffer,1M,pH9.0 HEPES Buffer,1M,pH9.0 常溫保存 0.5mL dTTP溶液,100mM dTTP Solution -20℃保存 2 ug pLKO.1 - TRC cloning vector pLKO.1 - TRC cloning vector 低溫運輸,-20℃保存 Letheen瓊脂 Letheen Agar 250g
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