操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱:EGFR抑制劑(Pelitinib) 英文名稱:Pelitinib 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7860 Pelitinib(EKB-569;WAY-EKB569)是可逆的EGFR抑制劑,IC50值為38.5nM。也可輕微抑制Src,MEK/ERK和ErbB2,IC50值分別為282,800,和1255nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :257933-82-7 別名:EKB-569;WAY-EKB 569 純度:98.65% 分子量:467.92 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細胞處理: 1) 復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法: 1、細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 原蘇木素B 英文名: Protosappanin B CAS登錄號: 102036-29-3 分子式: C16H16O6 分子量: 304.09 蔓荊子黃素 英文名: Vitexicarpin 英文別名: Casticin CAS登錄號: 479-91-4 分子式: C19H18O8 牡荊素 英文名: Vitexin 英文別名: Apigenin 8-C-glucoside; Vitexina; 4H-1-Benzopyran-4-one, 8-β-D-glucopyranosyl-5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)- CAS登錄號: 3681-93-4 分子式: C21H20O10 馬錢苷酸 英文名: Loganic acid 英文別名: Loganate CAS登錄號: 22255-40-9 分子式: C16H24O10 乙酰哈巴苷 英文名: 8-O-Acetylharpagide 英文別名: Acetylharpagide; (1S,4aS,5R,7S,7aS)-1-(hexopyranosyloxy)-4a,5-dihydroxy-7-methyl-1,4a,5,6,7,7a-hexahydrocyclopenta[c]pyran-7-yl acetate CAS登錄號: 6926-14-3 分子式: C17H26O11 EGFR抑制劑(Pelitinib)尿沉渣染色液(Sternheimer-Malbin法) 50ml|100ml 1瓶 A2780/Taxol細胞株 A2780/Taxol 低溫運輸和保存 精子稀釋液(含Trypan Blue,計數(shù)液) 100ml 1個 15mLDNA超濾離心管(90-150KD) 白細胞稀釋液(計數(shù)液) 100ml 500次 總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存 精子稀釋液(計數(shù)液) 100ml 100mL Methylene Blue Stain,100x Methylene Blue Stain,100x 常溫保存 精子活體染色液(伊紅法) 10ml 100次 真菌種屬鑒定 PCR Mix 3(LSU) Fungal DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存 精子形態(tài)學(xué)快速染色液(Diff-Quik法) 3×20ml|3×100ml 2 ug pAN7-1 pAN7-1 低溫運輸,-20℃保存 精子形態(tài)學(xué)染色液(巴氏法) 4×20ml|4×100ml|4×500ml 疊氮鈉-七葉苷瓊脂 250g 微絲染色液(R250法) 5×20ml|5×50ml 1瓶 RYTF細胞株 RYTF 低溫運輸和保存 堿性蛋白染色液(細胞專用) 2×50ml 萘啶酮酸2.25mg 2.25mg/支*5 酸性蛋白染色液(細胞專用) 2×50ml 10g 脫氧膽酸 Deoxycholic Acid 室溫干燥保存 堿性固綠染色液 2×50ml 50T 副流感病毒Ⅲ型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
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