凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務,若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 腦動脈血管平滑肌細胞 | Human brain vascular smooth muscle cells | 5×105cells |
產品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 兔促血管生成素1(ANG1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔S抗原(SAG)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔趨化因子C-X3-C-基元配體(CX3CL1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔血管緊張素II受體1(ANG II R1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔血漿谷胱甘肽過氧化物酶(GPX3)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔葡萄糖氧化酶(GOD)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔T細胞急性淋巴母細胞白血病相關抗原(TALLA-1/CD231)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔抗中性粒細胞彈性蛋白酶抗體(ANEA)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔苯丙氨酸羥化酶 (PAH)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔SPARC樣蛋白1(SPARCL1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔白細胞分化抗原30配體(CD30L)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔G蛋白β1(GNβ1)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔抑肽酶(AP)酶聯免疫吸附測定試劑盒 兔GATA結合蛋白3(GATA3)酶聯免疫吸附測定試劑盒 腦動脈血管平滑肌細胞Rabbit Anti-mouse IgM/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.1mlphospho-FER/TYK3(Tyr402) 磷酸化酪氨酸蛋白激酶3抗體 規(guī)格: 0.1ml Phospho-NFKBIB (Ser23) 磷酸化KB抑制蛋白β抗體 規(guī)格: 0.1mlMuc2 粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體 規(guī)格: 0.1ml DIS/CCAR1 細胞周期及凋亡調節(jié)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlBARD1 易感基因環(huán)狀結構域蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml HIV p55+NP7 艾滋病病毒抗體 規(guī)格: 0.2mlrhIL-18 重組人白細胞介素18抗體 規(guī)格: 0.1ml Rabbit Anti-Biotin/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗生物素抗體IgG 規(guī)格: 0.1ml PIK3C3/PI3 kinase type 3 磷脂酰肌醇激酶3催化亞單位3抗體 規(guī)格: 0.1ml TMEM2L/KIAA1199 跨膜蛋白2樣蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml Phospho-MEF2A (Thr312) 磷酸化肌細胞增強因子2抗體 規(guī)格: 0.1ml NIFK KI67相互作用蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml RNA polymerase II CTD repeat YSPTSPS (phospho S2) 磷酸化RNA聚合酶II CTD抗體 規(guī)格: 0.1ml LMW Kininogen/Kininogen 1 低分子量生促進因子抗體(激肽原1) 規(guī)格: 0.2ml TSLP 胸基質淋巴細胞生成素-1抗體 0.1ml CCL1/TCA3/I-309 嗜酸粒細胞趨化蛋白CCL1抗體 規(guī)格: 0.1ml FAM3A 胰衍生因子抗體 規(guī)格: 0.1ml |