中文名稱：不可逆抑制劑(Pentostatin)

英文名稱：Pentostatin

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7285

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

Duck Hepatitis B Virus(DHBV)鴨乙型肝炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HMG14/HMGN1  高遷移率核小體結(jié)合蛋白1 規(guī)格: 0.1mlGoat Anti-human IgM/AP  堿性磷酸（AP）標記的羊抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml

Herba taxilli桑寄生LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周MAP-9  微管相關(guān)蛋白9抗體 規(guī)格: 0.2mlATXN7L3B  共濟失調(diào)7樣蛋白3B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Bovine Herpes Mammillitis Virus(BHMV)牛皰疹炎病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周TACC1  、胃抗原GA55抗體 規(guī)格: 0.2mlATG3  自噬相關(guān)蛋白3抗體 規(guī)格: 0.1ml

Histoplasm spp.組織胞漿通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周HIV p55+P6-Gag  艾滋毒抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM91A1  FAM91A1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

erwinia carotovora subsp atroseptica胡蘿卜軟腐歐文氏馬鈴薯黑脛亞種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Phospho-CDK2 (Thr160)  磷酸化周期素依賴性激2抗體 規(guī)格: 0.1mlMCPIP1  單核細胞趨化誘導(dǎo)蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Fructus psoraleae補骨脂PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Rabbit Anti-Monkey IgM/HRP  辣根過氧化物標記的兔抗猴IgM 規(guī)格: 0.1mlENPP1  核苷酸內(nèi)焦磷酸/磷酸二酯1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Cache Valley Virus(CVV)卡奇谷病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Integrin alpha 2b/CD41  小板膜糖蛋白ⅡbⅢa抗體 規(guī)格: 0.1mlCA13  碳酸酐 規(guī)格: 0.2ml

Chikungunya Virus(CHIKV)基孔肯尼雅病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HSP27 (Ser82)  磷酸化熱休克蛋白27抗體 規(guī)格: 0.1ml

Natrii sulfas染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Calpain 2  鈣激活的中性蛋白2抗體 規(guī)格: 0.1mlATG18/WIPI1  自噬相關(guān)蛋白18抗體 規(guī)格: 0.2ml

Erysipelothrix spp丹毒絲屬通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mouse Anti-Goat IgG  小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 1mgProteasome 20S C2  蛋白體PSMα1抗體 規(guī)格: 0.2ml

不可逆抑制劑(Pentostatin)糊精水溶液(1%)

蘇丹黑B染色液

蘇丹黑B染色液(細胞專用)

耐爾藍染色液(Cain法)

改良油紅O染色液

磷脂染色液(酸性蘇木紅法)

磷脂鐵蘇木素(FeH)染色液

姬姆薩染色液(Giemsa stain,即用型)

姬姆薩染色液(Giemsa stain,1:9)

姬姆薩染色液(10×Giemsa stain)

瑞氏染色液(Wright stain,即用型)

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)