操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱:HSP90抑制劑(BIIB021) 英文名稱:BIIB021 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg 產(chǎn)品貨號(hào):BJ-01X7847 BIIB021是一種可全合成的HSP90抑制劑,Ki值和EC50值分別為1.7nM和38nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :848695-25-0 別名:CNF2024 純度:99.62% 分子量:318.76 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。 甲基辛弗林鹽酸鹽 英文名: 4-hydroxyephedrine hydrochloride 英文別名: DL-1-(4-Hydroxyphenyl)-2-methyl-2-methylaminoethanol hydrochloride CAS登錄號(hào): 7437-54-9 分子式: C10H16ClNO2 異澤蘭黃素 英文名: Eupatilin 英文別名: 2-(3,4-Dimethoxyphenyl)-5,7-dihydroxy-6-methoxychromen-4-one CAS登錄號(hào): 22368-21-4 分子式: C18H16O7 棕矢車菊素 英文別名: 5,7-dihydroxy-2-(4-hydroxy-3-methoxy-phenyl)-6-methoxy-chromen-4-one CAS登錄號(hào): 18085-97-7 分子式: C17H14O7 分子量: 330.29 芹菜苷 英文名: Apioside 英文別名: 7-[(2-O-D-apio-beta-D-furanosyl-beta-D-glucopyranosyl)oxy]-5-hydroxy-2-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one CAS登錄號(hào): 26544-34-3 分子式: C26H28O14 異芒果苷 英文名: Isomangiferin 英文別名: 4-D-Glucopyranosyl-1,3,6,7-tetrahydroxy-9H-xanthen-9-one CAS登錄號(hào): 24699-16-9 分子式: C19H18O11 甜茶苷 英文名: Rubusoside 英文別名: );(4alpha)-13-(beta-D-Glucopyranosyloxy)kaur-16-en-18-oic acid beta-D-glucopyranosyl ester CAS登錄號(hào): 64849-39-4 分子式: C32H50O13 七葉皂苷B 英文名: Escin IB 英文別名: Aescin IB;22α-(Acetyloxy)-16α,24,28-trihydroxy-21β-[[(Z)-2-methyl-1-oxo-2-butenyl]oxy]oleana-12-ene-3β-yl 4-O-[2-O-(β-D-gluco-hexopyranosyl)-β-D-gluco-hexopyranosyl]-β-D-gluco-hexopyranosiduronic acid CAS登錄號(hào): 26339-90-2 分子式: C55H86O24 七葉皂苷A 英文名: Escin IA 英文別名: Aescin IA CAS登錄號(hào): 123748-68-5 分子式: C55H86O24 土槿皮甲酸 英文名: Pseudolaric acid A 英文別名: (2E,4E)-5-[(3R,4S,4aS,9aR)-4a-(Acetyloxy)-3,4,4a,5,6,9-hexahydro-3,7-dimethyl-1-oxo-1H-4,9a-ethanocyclohepta[c]pyran-3-yl]-2-methyl-2,4-pentadienoic acid CAS登錄號(hào): 82508-32-5 分子式: C22H28O6 大豆皂苷Bb 英文名: Soyasaponin BB 英文別名: Soyasaponin I CAS登錄號(hào): 51330-27-9 分子式: C48H78O18 單咖啡酰灑石酸 英文別名: (2R,3R)-2-[[(E)-3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-1-oxo-2-propenyl]oxy]-3-hydroxybutanedioic acid CAS登錄號(hào): 67879-58-7 分子式: C13H12O9 分子量: 312.23 HSP90抑制劑(BIIB021)革蘭氏染液 100T 500U 限制性內(nèi)切MboI Restriction Endonuclease -20℃保存 堿性磷酸酶染液(偶氮偶聯(lián)法,適用于細(xì)胞樣本) 可染20-30張片 cALP Stain Kit1kit Protein Coupling Kit Protein Coupling Kit 常溫保存 吉姆薩染色液 100ml Giemsa Stain Solution1個(gè) 暗盒(8×10英寸) Cassette 室溫 活細(xì)胞核染料(紅) 500μL 100mL 甲酰胺 Formamide 4℃保存 核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(單分子轉(zhuǎn)位)(FM法) 100T 50T 鉤端螺旋體PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(雙分子/多波長(zhǎng)轉(zhuǎn)位)(HCS法) 100T 100mg AMPPD AMPPD 4℃保存 線粒體細(xì)胞核轉(zhuǎn)位分析試劑盒(HCS法) 100T 2 ug T-Rex system T-Rex system 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 PluronicF-127 1g 10g 酸洗玻璃珠(直徑:200μm) 常溫 抗酒石酸酸性磷酸酶染液 20T 2 ug pAcAd5 CMVK-NpA pAcAd5 CMVK-NpA 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 快速瑞氏染液 250ml×3 含TSA平板 9cm*10/包 瑞氏-姬姆薩復(fù)合染液 250ml×3 1瓶 BGC-803細(xì)胞株 BGC-803 低溫運(yùn)輸和保存
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