培養(yǎng)操作步驟 ：

1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。 

產(chǎn)品參數(shù)：

商品詳細(xì)介紹：

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明：

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法；

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理；

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕；

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率；

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

人 KCTD18 基因全長(zhǎng)ORF克隆人協(xié)同刺激分子受體(CMR)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 MIOX 基因全長(zhǎng)ORF克隆人小而密低密度脂蛋白(sLDL)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

人 KCTD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 ADAM7 基因全長(zhǎng)ORF克隆人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2(AFP-L2)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 TMEM91 基因全長(zhǎng)ORF克隆人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1(AFP-L1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 NR2C2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人相撲結(jié)合UBC9(UBE2I/UBC9/UBCE9)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

人 USP32 基因全長(zhǎng)ORF克隆人腺核苷酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(ANT)自身抗體免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

人 LMAN2L 基因全長(zhǎng)ORF克隆人腺苷脫氨(ADA)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝

人 USP37 基因全長(zhǎng)ORF克隆人腺苷酸環(huán)化1(AC-1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 TMIGD2 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長(zhǎng)ORF克隆人腺苷三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2(ABCG2)免疫試劑盒*直銷(xiāo)

人 TMIGD2 轉(zhuǎn)錄變體2 基因全長(zhǎng)ORF克隆人腺苷三結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝

RhoA/C介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)錄抑制劑(CCG-1423)ACE抑制劑（Enalaprilat dihydrate）  1mL(10mM)|50mg|100mg  Enalaprilat dihydrate20次 中草藥DNAout Herbal DNAOUT 常溫

TXA2合成酶抑制劑(Ozagrel)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Ozagrel50T 偏肺病毒PCR檢測(cè)試劑盒  低溫運(yùn)輸，-20℃保存

Na+,K+andCa2+電流抑制劑(Dronedarone Hydrochloride)  1mL(10mM)|10mg|50mg  Dronedarone Hydrochloride1盒 X 光片（5×7英寸） X-Ray Film 避光保存

NEP抑制劑（AHU-377 hemicalcium salt）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|500mg|1g  AHU-377 hemicalcium salt2 ug pKD1 pKD1 低溫運(yùn)輸，-20℃保存

ACE抑制劑（Perindopril erbumine）  1mL(10mM)|100mg|500mg  Perindopril erbumine液體沙氏培養(yǎng)基 Liquid Sabourand Medium 250g

NQO2抑制劑（Dabigatran ethyl ester hydrochloride）  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Dabigatran ethyl ester hydrochloride1瓶 MDA-MB-157細(xì)胞株 MDA-MB-157 低溫運(yùn)輸和保存

血小板聚集抑制劑(Aglafoline)  1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg  Aglafoline月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯（LST） Lauryl Sulfate Tryptose Broth 250g

血小板聚集抑制劑（N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine）  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  N6-(4-Hydroxybenzyl)adenosine25U 脫羧 Tyrosine Decarboxylase  -20℃保存

P2Y12受體抑制劑（Clopidogrel thiolactone）  1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg  Clopidogrel thiolactone1000mL TBS-Tween-20 (TTBS),20X   TBS-Tween-20 (TTBS),20X   常溫保存

Nrf2信號(hào)通路激活劑(Danshensu)  1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg  Danshensu100µL 兔抗His標(biāo)簽多抗，HRP標(biāo)記 Anti His-tag PAb，HRP-Labeled 4℃保存

SOCE抑制劑（Tanshinone IIA sulfonate sodium）  1mL(10mM)|10mg|25mg  Tanshinone IIA sulfonate sodium500mL Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.5  Tris-HCl Buffer,1.0M,pH6.5  常溫保存