操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：SIRT2抑制劑(Thiomyristoyl)

英文名稱：Thiomyristoyl

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X8223

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

人 METAP1D / MAP1D 基因全長ORF克隆人α1β糖蛋白(α1β-GP)免疫試劑盒進口、組裝

人 EphrinA1 基因全長ORF克隆人α/β干擾素受體(IFN-α/βR)免疫試劑盒進口、分裝

人 EphrinB2 基因全長ORF克隆人Z-DNA結(jié)合蛋白1(ZBP1)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CXCL14 / BRAK 基因全長ORF克隆人Wnt-3a蛋白(WNT3A)免疫試劑盒*直銷

人 CXCL17 基因全長ORF克隆人v-rel禽網(wǎng)狀內(nèi)皮細胞過多癥病毒癌基因同源物B(RelB)免疫試劑盒進口、組裝

人 CXCL7 基因全長ORF克隆人vav3鳥核苷酸交換因子(VAV3)免疫試劑盒進口、分裝

人 CXCL1 基因全長ORF克隆人U型肌酸激,線粒體(CKMT1A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

人 CXCL11 基因全長ORF克隆人UV切除修復(fù)蛋白RAD23 同源物A(RAD23A)免疫試劑盒*直銷

人 CXCL4 / PF4 基因全長ORF克隆人U1小核核糖核蛋白A(SNRPA)免疫試劑盒進口、組裝

人 GLIPR1 基因全長ORF克隆人T細胞急性淋巴母細胞白血病相關(guān)抗原(TALLA-1/CD231)免疫試劑盒進口、分裝

人 CD120a / TNFRI 基因全長ORF克隆人T細胞活化連接蛋白(LAT)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

SIRT2抑制劑(Thiomyristoyl)Cy3免疫熒光檢測試劑盒(山羊)  100次|300次  Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Goat)50mL Q交換介質(zhì) Q Medium 常溫干燥封袋保存

Cy3免疫熒光檢測試劑盒(兔)  100次|300次  Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Rabbit)2 ug pTet-On advanced pTet-On advanced 低溫運輸，-20℃保存

Cy3免疫熒光檢測試劑盒(小鼠)  100次|300次  Cy3 Immunofluorescence Detection Kit (Mouse)100mL 非凍型尿液DNA保存液 Urine DNALOCKER 室溫

免疫組化試劑盒(適用于兔/小鼠一抗)  20次|50次  Immunohistochemistry Kit(Apply to rabbit or mouse primary antibody)2 ug pDsRed1-N1 pDsRed1-N1 低溫運輸，-20℃保存

極超靈敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒  100mL|500mL  BeyoECL UT Kit For Western Blot含1%棉籽糖的PY培養(yǎng)基  1ml*20支

內(nèi)源性過氧化物酶封閉液(增強型)  100mL  Enhanced Endogenous Peroxidase Blocking Buffer1kg 變色硅膠 Silica Gel 室溫干燥保存

內(nèi)源性過氧化物酶封閉液  100mL  Endogenous Peroxidase Blocking Buffer50T 血清型耶爾森氏菌ail基因常規(guī)PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存

免疫染色強力通透液  100mL|500mL  Enhanced Immunostaining Permeabilization Solution200 mL 人腫瘤細胞分離液1.055 Cell Separation Solution -20℃保存

玻璃標(biāo)本瓶/染色缸(圓)  1EA  Glass Specimen Bottle/Staining Jar (Round)100mL HEPES Buffer,0.5M,pH7.0  HEPES Buffer,0.5M,pH7.0  常溫保存

載玻片染色缸(可裝60片)  1EA  Compact Glass Staining Jar(60-Place)0.1mL 綠如藍染料，PCR級 DNAGREEN, PCR Grade -20℃保存

載玻片染色缸(可裝30片)  1EA  Compact Glass Staining Jar(30-Place)2 ug pLenti 6/TR pLenti 6/TR 低溫運輸，-20℃保存