細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

中文名稱：EGFR抑制劑(AZD-9291)

英文名稱：AZD-9291

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7063

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

Calyx kaki柿蒂探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周SCN3B  電壓門控鈉通道SCN3B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mycobacterium avium鳥分枝桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MMP-8  基質(zhì)金屬蛋白-8抗體 規(guī)格: 0.1mlFibrinopeptide B  纖維蛋白肽B抗體（纖肽B） 規(guī)格: 0.2ml

Davainea proglottina節(jié)片代凡絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周NFKB p65  細胞核因子/k基因結(jié)合核因子抗體 規(guī)格: 0.1mlPeroxiredoxin 2/PRXII  硫氧還蛋白過氧化物Ⅱ/巰基抗氧化蛋白抗體 0.1ml

Pasteurella multocida兔巴氏桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Signal recognition particle  信號識別顆粒抗體 規(guī)格: 0.1mlGDPD3  甘油磷酸二酯磷酸結(jié)構(gòu)域3抗體 規(guī)格: 0.2ml

Human T-cell Lymphoma Virus(HTLV)人類嗜T淋巴  病毒通用RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周VEGFR3  管內(nèi)皮細胞生因子受體3抗體 規(guī)格: 0.1mlFGF10  成纖維細胞生因子10抗體 規(guī)格: 0.1ml

Echinococcus spp.棘球絳蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MMRN1/ECM  內(nèi)皮細胞MMRN1蛋白抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-human IgG/FITC  FITC標(biāo)記的兔抗人IgG 規(guī)格: 0.3ml

Radix adenophorae南沙參LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周VANGL1/LPP2  瘤抑制基因LPP2抗體 規(guī)格: 0.2mlPCDHA5  原鈣粘附蛋白α5抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rhizoma zingiberis preparatum炮姜PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Phospho-PDGFRA(Tyr988)  磷酸化小板源性生因子受體α 規(guī)格: 0.1mlp73 alpha  p53相關(guān)蛋白P73α抗體 規(guī)格: 0.2ml

Cryptosporidium spp.隱孢子蟲通用LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周cGMP  環(huán)磷酸鳥苷抗體 規(guī)格: 0.2mlLipophilin B  親脂性蛋白B抗體 規(guī)格: 0.2ml

Rotavirus D輪狀病毒D群探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ACBD6  ?；oA結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體 規(guī)格: 0.2mlC21orf87  21號染色體開放閱讀框87抗體 規(guī)格: 0.2ml

EGFR抑制劑(AZD-9291)大鼠巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)免疫試劑盒進口、分裝

人異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

大鼠N-甲基-D-天門冬(NMDA)受體亞單位NR2 免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)

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單料緩沖蛋白胨水管 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：10ml*20支

人可溶性血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)免疫試劑盒進口、組裝

TTC瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱：TTC Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格：250g

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Preston肉湯添加劑 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：1ml*5

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