操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Src/Abl抑制劑(Bosutinib)

英文名稱：Bosutinib

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg

產(chǎn)品貨號：BJ-01X7441

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

Fructus canarii青果LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Omgp  少突細胞髓磷脂糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml

Radix ginseng人參PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周SERINC3  絲合并蛋白3抗體（瘤差異表達蛋白） 規(guī)格: 0.2ml

Human Rhinovirus 16 人鼻病毒16 LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周MYLK3  肌球蛋白輕鏈激3抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG  羊抗牛IgG 規(guī)格: 1mg

Equine Herpesvirus 4 (EHV-4)馬皰疹病毒4型探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周VAMP-3  囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlC9orf174  9號染色體開放閱讀框174抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix dichroae常山探針法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周Phospho-PBK/TOPK(Thr9)  磷酸化PDZ連接激/T-LAK細胞源蛋白激抗體 規(guī)格: 0.1mlEphA7/Eph receptor A7  酪蛋白激受體A7抗體 規(guī)格: 0.2ml

Chrysomya bezziana倍贊氏金蠅LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周NIT1  水解1抗體 規(guī)格: 0.2mlFAM61B/LSM14B  FAM61B蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml

Classical Swine Fever Virus-WT(CSFV-WT)豬瘟病毒野生株探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-rat IgG  小鼠抗大鼠IgG 規(guī)格: 1mgRCBTB1/CLLD7  核苷酸交換因子抗體 規(guī)格: 0.2ml

Radix aucklandiae木香LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-4周phospho-PTPN7(Ser93)  磷酸化非受體型蛋白酪磷酸7抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-c-Kit(Tyr703)  磷酸化原基因c-kit抗體 規(guī)格: 0.1ml

Arcanobacterium haemolyticum溶血隱秘桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周BACE1/ASP2  β分泌抗體 規(guī)格: 0.1mlSA1/Nuclear protein stromal antigen 1  粘結(jié)蛋白SA1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Ureaplasma diversum差異脲原體探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負(fù)20度 一年 2-3周Mouse Anti-Rabbit IgM/RBITC  羅丹明標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 規(guī)格: 0.1mlABI1  ABI1/SSH3BP1蛋白抗體 0.1ml

Src/Abl抑制劑(Bosutinib)CYP3A4/5抑制劑配體(Veledimex)

IDO抑制劑(IDO-IN-6)

肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶1抑制劑（Perhexiline maleate）

腺苷受體激動劑(NECA)

CYP1A1抑制劑(TMS)

GRK抑制劑（CCG215022）

p18抑制劑(NSC23005 sodium)

PARP-1抑制劑(NMS-P118)

細胞增殖抑制劑(F16)

dipeptidyl peptidase II抑制劑

CYP1A酶抑制劑(Diosmetin)