操作規(guī)程 1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí). 2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。 7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。 8、結(jié)果分析 a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100 b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90) 中文名稱:CHK1抑制劑(CCT244747) 英文名稱:CCT244747 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg 產(chǎn)品貨號:BJ-01X7971 CCT244747是一個(gè)強(qiáng)的,高選擇性的,能夠,ATP競爭的CHK1抑制劑,IC50是29-170nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! :1404095-34-6 純度:98.0% 分子量:408.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程: 一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備: 1) 準(zhǔn)備F-12K培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。 2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。 二. 細(xì)胞處理: 1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)方法: 1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次; ②加入2ml0.25%(T25瓶),使覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化; ③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止; ④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清; ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基; ⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細(xì)胞復(fù)蘇: ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。 3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%(T25瓶) ②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化; ③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞; ④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。 人 ECHS1 基因全長ORF克隆小鼠FAM84A蛋白(FAM84A)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 NAPA 基因全長ORF克隆小鼠FAM172A蛋白(FAM172A)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 HLF 基因全長ORF克隆小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 CCDC101 基因全長ORF克隆小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)免疫試劑盒*直銷 人 YIF1A 基因全長ORF克隆小鼠E3泛素蛋白連接TRIM68(TRIM68)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 HSD11B1 基因全長ORF克隆小鼠D-乳酸脫氫(D-LDH)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 HMG20B 基因全長ORF克隆小鼠D-乳酸免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) 人 AKR1B10 基因全長ORF克隆小鼠D-甘油醛3-免疫試劑盒*直銷 人 WDR83 基因全長ORF克隆小鼠D二聚體(D2D)免疫試劑盒進(jìn)口、組裝 人 CCDC51 基因全長ORF克隆小鼠DNA(胞-5)甲基轉(zhuǎn)移3B(DNMT3B)免疫試劑盒進(jìn)口、分裝 人 PPIE 基因全長ORF克隆小鼠DNA(胞-5)甲基轉(zhuǎn)移3A(DNMT3A)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng) CHK1抑制劑(CCT244747)TrkA抑制劑(GW 441756) 1mL(10mM)|10mg|50mg GW 4417565g 堿性品紅 Fuchsin Basic 室溫保存 Eg5變構(gòu)抑制劑(Litronesib) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Litronesib50T 漢坦病毒PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 CYP17裂解酶抑制劑(VT-464) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg VT-46430µL GAPDH小鼠單抗 GAPDH Mouse MAb -20℃保存 CDK1/2抑制劑(BMS-265246) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg BMS-2652462 ug pBI 121 pBI 121 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 AGC kinase抑制劑(AT13148) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg AT131485mL TCEP 溶液,0.5M TCEP Solution -20℃保存 Hhat小分子抑制劑(RU-SKI 43 hydrochloride) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg RU-SKI 43 hydrochloride2 ug pEYFP-Golgi pEYFP-Golgi 低溫運(yùn)輸,-20℃保存 葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)1抑制劑(STF-31) 1mL(10mM)|10mg|50mg STF-31含的TSA表面接觸皿(55cm) 10個(gè)/包 Aurora A/Aurora B和Aurora C抑制劑(CCT129202) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg CCT1292021瓶 CCC-Ca761-03細(xì)胞株 CCC-Ca761-03 低溫運(yùn)輸和保存 泛RAF抑制劑(TAK-632) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg TAK-632乳糖蛋白胨培養(yǎng)液顆粒 Lactose Peptone Broth 300ml/袋*10 PDK1抑制劑(PDK1 inhibitor) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PDK1 inhibitor500U Long-Taq DNA聚合 Long-Taq DNA Polymerase -20℃保存 JAK3抑制劑(JANEX-1) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg JANEX-1250mL Para-formaldehyde-Glytaraldehyde in Phosphate Buffer Para-formaldehyde-Glytaraldehyde in Phosphate Buffer 常溫保存
|