操作規(guī)程 1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時. 2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。 6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。 7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。 8、結果分析 a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100 b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90) 中文名稱：酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250T|500T|1000T 產(chǎn)品貨號：BJ-01X6518 AlamarBlue 酵母活性檢測試劑盒是應用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍快速高靈敏度檢測酵母活性的比色檢測產(chǎn)品。 AlamarBlue 是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)酵母的代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號。這種測定是基于具有代謝活性的細胞將試劑轉換成熒光和比色指示劑的能力。受損和無活性細胞具有較低的天然代謝活性，因此對應的信號較低。 AlamarBlue 在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在酵母細胞增殖過程中，細胞內(nèi)處于還原環(huán)境。進入酵母細胞內(nèi)的活性檢測染料被代謝中間體及細胞色素類還原后釋放到酵母細胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍變成有熒光的粉紅色。后用普通分光光度計或熒光光度計進行檢測，吸光度和熒光強度與活性酵母細胞數(shù)成正比。染料經(jīng)過驗證安全無毒，可以用于酵母細胞活性和酵母細胞增殖的定量分析細胞毒性研究。 AlamarBlue 的無毒特性使酵母細胞可長期暴露于這種染料，因此可隨時間進行測量或進行終點測量。 AlamarBlue 法采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測酵母細胞的增生狀態(tài)。由于AlamarBlue對酵母細胞無毒、無害，不影響細胞的蛋白質(zhì)合成與分泌等活性，因此可以對同一批酵母細胞的增生狀態(tài)進行連續(xù)觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾酵母細胞正常代謝的特點。 儲存條件：檢測液2-8℃避光保存； 有效期：一年。 |
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程： 一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備： 1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。 2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。 3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。 二． 細胞處理： 1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。 2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)方法： 1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次； ②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化； ③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止； ④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清； ⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基； ⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 2、細胞復蘇： ①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。 ②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。 3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種 ①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶） ②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化； ③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞； ④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉入液氮罐儲存。 E.coli大腸桿通用探針法熒光定量PCR試劑盒(含致病性和非致病性) 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Xanthomonas hortorum pv. pelargonii野油菜黃單胞天竺葵致病變種PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Herba lobeliae chinensis半邊蓮LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Radix dichroae常山LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Human Metapneumo Virus(hMPV)人偏肺病毒RT-LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 獼猴源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Ramulus cinnamomi桂枝PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周 Gyrodactylus salaris三代蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 杏仁源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Streptococcus sanguinis 血紅鏈球LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Eperythrozoon wenyoni牛附紅 體（牛嗜血支原體）探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測（科研用） 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 Soil-borne Wheat Mosaic Virus(SbWMV)土壤傳播的小麥花葉病毒RT-PCR試劑盒 植物病原微生物檢測（科研用）/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周 酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue山羊白介素12(IL-12/P40)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 大鼠催乳素(PRL)免疫試劑盒*直銷 人細胞膜DNA抗體(cmDNA)免疫試劑盒進口、組裝 魚乙酰酯(AChE)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 人內(nèi)皮抑素(ES)免疫試劑盒進口、分裝 V-P半固體瓊脂 英文名稱：Voges-Proskauer Semisolid Agar 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人抗G2s抗體(IgG)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應 胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）（2015藥典） 英文名稱：TSB 產(chǎn)品規(guī)格：250g 人低氧誘導因子3α(HIF-3α)免疫試劑盒*直銷 乳糖（腦膜炎奈瑟氏菌專用） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20ml/支 人P2蛋白抗體(IgG)免疫試劑盒進口、組裝
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