凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 淋巴成纖維細胞規(guī)格 | Human Lymphatic Fibroblasts | 5×105cells |
產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應(yīng)作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 柯里拉京 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 絲裂原活化蛋白激酶激酶4抗體 黃芪皂苷III;Astragalosid 規(guī)格: 10mg 訂購|咨詢 Western Blot封閉液Ⅰ(BSA,pH7.5)/Blocking Buffer(BSA)500ml100ml、500ml 嘧酚酯;純品型;標準品;有證書 訂購|咨詢 規(guī)格: 0.1g 基膜聚糖蛋白抗體 APLNR ELISA Kit Apelin受體(APLNR)ELISA試劑盒 卡因 訂購|咨詢 規(guī)格: 50mg 細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶1抗體 NUP133 ELISA Kit 133kDa核孔蛋白(NUP133)ELISA試劑盒 地榆皂苷Ⅰ 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 化蛋白激酶B抗體 VE-cad ELISA Kit 血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)ELISA試劑盒 蘇木素;Hematoxylin 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 16HBE(人支氣管上樣細胞)5×106cells/瓶×2 馬兜鈴A 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 化胰島素受體底物1抗體 TAF1 ELISA Kit TATA框結(jié)合蛋白關(guān)聯(lián)因子1(TAF1)ELISA試劑盒 一枝蒿素 ;Bullatine A 規(guī)格: 20mg 訂購|咨詢 NCI-H524(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2 克林酯 英文名稱:Clindamycin phosphate 保存:-20℃ 規(guī)格:200mg 唑抗體 N-去基伐非 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 N-Desethyl Vardenafil EB增菌肉湯培養(yǎng)基基礎(chǔ)/EB增菌液/EB Enrichment Broth Medium單核細胞增生李氏特菌增菌250克國產(chǎn)/進口 附子靈;Fuziline 訂購|咨詢 規(guī)格: 20mg 化熱休克蛋白70抗體 Amyβ ELISA Kit 淀粉酶β(Amyβ)ELISA試劑盒 雷尼替N-氧化物 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 Ranitidine N-Oxide CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系 款冬花對照藥材 訂購|咨詢 規(guī)格: 1g RasGTP酶激活蛋白IQGAP3抗體 IL8Rα ELISA Kit 白介素8受體α(IL8Rα)ELISA試劑盒 淋巴成纖維細胞規(guī)格胡黃連 CAS 規(guī)格: 0.5g 訂購|咨詢 雙羥萘酸 CAS 22204-24-6 規(guī)格: 50mg 訂購|咨詢 抗眼鏡蛇血 CAS 規(guī)格: 訂購|咨詢 阿洛林 CAS 37091-66-0 規(guī)格: 100mg 訂購|咨詢 長春瑞濱 CAS 125317-39-7 規(guī)格: 50mg 訂購|咨詢 4-差向金 CAS 規(guī)格: 50mg 訂購|咨詢 羅漢果苷IV CAS 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支; 訂購|咨詢 Hederacolchiside A1 CAS 106577-39-3 規(guī)格: HPLC≥98%;5mg/支 訂購|咨詢 遼東楤木皂苷V CAS 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 秦皮素;秦皮亭;白蠟樹內(nèi)酯 CAS 574-84-5 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 辛辣內(nèi)酯A CAS 130430-97-6 規(guī)格: 5mg/支 訂購|咨詢 花旗松素;二氫槲皮素;紫杉葉素;黃杉素 CAS 480-18-2 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ; 蒼術(shù)內(nèi)酯I CAS 73069-13-3 規(guī)格: HPLC≥98%,20mg/支 訂購|咨詢 化木蘭花堿; 木蘭花堿; 唐松草堿; CAS 88273 規(guī)格: HPLC≥98%,10mg/支 訂購|咨詢 |