操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

中文名稱：Hoechst33258染色液(1mg/ml)

英文名稱：Hoechst33258 Staining Solution(1mg/ml)

產(chǎn)品規(guī)格：1ml|5×1ml

產(chǎn)品貨號：BJ-01X6678

細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備F-12K培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

100uL 6nt隨機引物（抗水解） Exo-Resistant Random Primer -20℃保存

紅煌綠瓊脂 Phenol Red Brilliant Green Agar 250g 0.156-10 ng/mL 豬水泡性口炎病毒(VSV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

50T 超級細菌PCR檢測試劑盒  低溫運輸，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人前原痛蛋白(PNOC)ELISA試劑盒

2 ug pTrcHis 2b pTrcHis 2b 低溫運輸，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL 人心肌肌鈣蛋白T(c)ELISA試劑盒

1瓶 GT1-1株 GT1-1 低溫運輸和保存 0.312-20 ng/mL 人滋養(yǎng)層抗原3β(HSD3B1)ELISA試劑盒

1.5mL DNA 非變性PAGE上樣液 DNA Native-PAGE Loading Buffer -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人泛素激活(NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit)ELISA試劑盒

20 mg MQAE（氯離子熒光探針） Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Ketohexokinase

50mL 丁基硫介質(zhì) Butyl-S Medium 常溫保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Creatinine

10管 穿刺培養(yǎng)基 Stab Medium 4℃保存KF鏈球菌瓊脂進口、國產(chǎn)KF Streptococcus Agar100克鏈球菌的選擇性分離和計數(shù)

250ml Glucose-Gelatin Veronal Buffer (GGVB)   Glucose-Gelatin Veronal Buffer (GGVB)   常溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Insulin-like growth factor-binding protein 7

50mL Zinc Sulfate Solution（硫酸鋅溶液）,100mM  Zinc Sulfate Solution,100mM  常溫保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Kallikrein-2

Hoechst33258染色液(1mg/ml)魚免疫球蛋白A(IgA)免疫試劑盒進口、組裝

白輕鏈kappa(κ-IgLC)免疫試劑盒*直銷

Kovcas氏靛基質(zhì)試劑盒 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：5ml*2

人精脫羧(ADC)免疫試劑盒進口、組裝

腸道菌增菌液體培養(yǎng)基（顆粒）（2015藥典） 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：250g

人蛋白激C(PKC)免疫試劑盒進口、分裝

7%NaCl胰胨水 英文名稱： 產(chǎn)品規(guī)格：20支

人Igγ3鏈C區(qū)(IGHG3)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

豬低氧誘導因子1α(HIF-1α)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應

牛印度刺猬因子(IHH)免疫試劑盒進口、分裝

小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)免疫試劑盒進口、組裝