培養(yǎng)操作步驟 : 1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布; 2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片); 3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時; 4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中; 5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。 本公司代理ATCC細胞,提供售前售后一條龍服務(wù),若要獲取詳細的說明書或價格信息,請咨詢在線客服。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 | 食管癌組織源細胞規(guī)格 | Source cell esophageal carcinoma tissues of human | 5×105cells |
產(chǎn)品特點: 1、 使用方便:不需昂貴設(shè)備。 2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。 3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。 4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。 5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。 6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。 7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。 8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。 ? 細胞培養(yǎng)技巧: 一、凍存時的注意事項: 1. 在冷凍保存之前,應(yīng)觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 % 2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質(zhì),例如是否有雜細胞或者支原體等。 3. 使用的DMSO 應(yīng)為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應(yīng)為試劑級等級,以高壓蒸汽 滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。 4. 冷凍保存的細胞濃度: 4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml 4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。 4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。 4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml。 5. 冷凍保護劑濃度為5 %或10 % DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應(yīng)作一個backup culture,以防止冷凍失敗。 凍存的步驟: 1. 冷凍前一日前更換半量或全量培養(yǎng)基,觀察細胞生長情形。 2. 使用ScienCell凍存液 混合均勻,置于室溫下待用。 3. 依細胞傳代培養(yǎng)的操作,收集培養(yǎng)好的細胞,取少量細胞懸浮液(約0.1 ml) 計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。 4. 離心,去除上清液,加入適量冷凍保存溶液,使細胞濃度為1-5 x 10^6 cells/ml,混合均勻, 分裝于已標示*之冷凍保存管中,1 ml/vial,并取少量細胞懸浮液作污染檢測。 5. 冷凍保存方法1: 冷凍管置于4 度10 分鐘→ -20 度 30 分鐘→ -80 度16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vapor phase 長期儲存。 6. 冷凍保存方法2: 冷凍管置于已設(shè)定程序之等速降溫機中,再放入液氮槽中。程序為: program 7: HB CELL 。 實驗報告: 一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 大鼠凝血酶(TM)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠發(fā)動蛋白1(DNM1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠雌二醇(E2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠上皮型鈣黏蛋白 (E-Cad)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠早期生長反應(yīng)蛋白1(EGR1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠早期生長反應(yīng)蛋白2(EGR2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠早期生長反應(yīng)蛋白3(EGR3)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1(Glut1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒ei#7耀,Rat GLUT1 (Glucose Transporter 1) ELISA Kit #7 大鼠葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2(Glut2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒IS#7耀*Rat GLUT2 (Glucose T 大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠髓樣前體細胞抑制因子2(MPIF2)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠彈性蛋白酶4(ELA4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 大鼠彈性蛋白微纖維界面蛋白1(EMILIN 1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 食管癌組織源細胞規(guī)格平板計數(shù)瓊脂 高營養(yǎng)培養(yǎng)基,用于分離、計數(shù)異養(yǎng)或“富營養(yǎng)”的細菌,水、廢水、食品、乳制品的細菌計數(shù)500g 緩沖蛋白胨水 (CM0509) Oxoid 定位顯色培養(yǎng)基 用于尿道細菌分離和鑒別,也可用于傷口感染標本的病原菌分離1000ml BL瓊脂培養(yǎng)基 250(g) 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基 250(g) 紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a) Oxoid 沙保氏液體培養(yǎng)基 (CM0147) Oxoid D/E中和瓊脂 能中和抗微生物的化學(xué)試劑,用于環(huán)境標本中檢測和計數(shù)表面微生物500g VJ瓊脂 分離樣品中凝固酶陽性、甘露醇發(fā)酵的金黃色葡萄球菌500g Legionella BCYE alpha-growth supplement 軍團桿菌CYEa-生長添加劑 1.10240.0001MERCK默克 Membrane-fiter Enterococcus selective agar acc.to SLANETZ and BARTLEY(base) 膜過濾腸球菌選擇瓊脂(基礎(chǔ)) 1.05289.0500MERCK默克 |