服務(wù)流程: 接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。 產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號(hào) | 牛免疫缺損病毒RT-LAMP試劑盒 | RT-LAMP kit for bovine immunodeficiency virus | BJ-P987598 |
它具有下列特點(diǎn): 1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供 DNA 模板。 2. 引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化,專一性強(qiáng),只擴(kuò)增鮑皰疹樣病毒,與其他植物沒(méi)有交叉反應(yīng)。 3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。 4. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。 5. 本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次,但只能用于科研。 ? 使用及效果: PCR反應(yīng)特點(diǎn) (1) 特異性強(qiáng) PCR反應(yīng)的特異性決定因素為: ①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合; ②堿基配對(duì)原則; ③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性; ④靶基因的特異性與保守性。 其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。 (2) 靈敏度高 PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。 (3) 簡(jiǎn)便、快速 PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。 (4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低 不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。 儲(chǔ)存條件: 僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法 1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。 2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。 3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。 5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟: 方法 1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5 μl dNTP mix (2mM) 4 μl 引物1(10pM) 2 μl 引物2(10pM) 2 μl Taq酶 (2U/μl) 1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。 2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。 3:結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。 4:PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。 5g芬娜冬菇Human SSTR2(Somatostatin receptor type 2) ELISA Kit 100g 枯草芽胞桿菌枯草亞種Human CASP7(Caspase-7) ELISA Kit 10g特異青霉(產(chǎn)黃青霉)Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) ELISA Kit 25g血痕韌革菌Human AMOT(Angiomotin) ELISA Kit 25MG鹽古桿菌Human APLN(Apelin) ELISA Kit 100g高盧蜜環(huán)菌Human GAS1(Growth arrest-specific protein 1) ELISA Kit 25g球孢白僵菌Human MASP2(Mannan-binding lectin serine protease 2) ELISA Kit 1g發(fā)酵成對(duì)桿菌Human TFR2(Transferrin receptor protein 2) ELISA Kit 5g節(jié)桿菌Human GP5(Plaet glycoprotein V) ELISA Kit 100g酮叢毛單胞菌Human KL(Klotho) ELISA Kit 25g香氣紅冬孢鎖擲孢酵母Human ULBP2(NKG2D ligand 2) ELISA Kit 5g檸檬原小單孢菌Human SEPT5(Septin-5) ELISA Kit 25g牛肝菌Human TPH2(Tryptophan 5-hydroxylase 2) ELISA Kit 5g大腸埃希氏桿菌Human TPH1(Tryptophan 5-hydroxylase 1) ELISA Kit 25g釀酒酵母Human NDST2(Bifunctional heparan sulfate N-deacetylase/N-sulfotransferase 2) ELISA Kit 5g布氏白僵菌(卵孢白僵菌)Human GAS1(Growth arrest-specific protein 1) ELISA Kit 1g腸產(chǎn)毒性大腸埃希氏菌Human MASP2(Mannan-binding lectin serine protease 2) ELISA Kit 牛免疫缺損病毒RT-LAMP試劑盒Phospho-Troponin I (Ser23/24) 磷酸化鈣調(diào)節(jié)蛋白-1抗體半乳糖3-芐氧基苯甲Human ENA-78 (Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78) ELISA Kit Calmodulin/CAM 鈣調(diào)節(jié)素抗體醋酸甲萘氫醌3-芐氧基苯甲Human GCP-2 (Granulocyte Chemotactic Protein 2) ELISA Kit CaMK2a 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體富馬酸氯馬斯汀4-氯-2-三氟甲基喹啉Human IL-8 (Interleukin 8) ELISA Kit phospho-CaMK2 alpha (Thr286) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體果糖4-氯-2-三氟甲基喹啉Human AAHA (Anti-Apolipoprotein Antibody) ELISA Kit phospho-CaMK2 alpha (Tyr231) 磷酸化鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2α抗體環(huán)吡酮胺(S)-4-異基-2-惡唑烷酮Human IP-10/CXCL10 (Interferon Gamma Induced Protein 10kDa) ELISA Kit Camk1g 鈣/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶IG抗體環(huán)己胺(S)-4-異基-2-惡唑烷酮Human I-TAC (Interferon Inducible T-cell Alpha Chemoattractant) ELISA Kit CaMK2 beta 鈣/鈣調(diào)素依賴蛋白激酶2b抗體環(huán)磷酰胺(S)-4-異基-2-惡唑烷酮Human SDF-1 (Stromal Cell Derived Factor 1) ELISA Kit CAP1 CAP1抗體己內(nèi)酰胺硫酸銀Human BLC (B-Lymphocyte Chemoattractant) ELISA Kit 操作步驟: 1:樣品準(zhǔn)備:取1毫升細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁和懸浮細(xì)胞都可以 已培養(yǎng)48小時(shí)以上),在16000g離心5分鐘,小心棄去上清,避免丟失沉淀(沉淀量有可能很少,目視看不到)。將沉淀用無(wú)菌PBS重懸,在16000g離心5分鐘,同樣小心棄去上清,如此反復(fù)用無(wú)菌PBS洗三次 將獲得的沉淀用100微升超純水重懸,置于100℃水浴中孵育5分鐘。如此制備好的樣品可在4℃保存1到2個(gè)月。 2:PCR反應(yīng)的準(zhǔn)備: 待各組份融化后先瞬時(shí)離心,然后輕彈混勻。按下表在已滅菌的PCR管中配制反應(yīng)體系,每次實(shí)驗(yàn)需加一個(gè)陰性和一個(gè)陽(yáng)性對(duì)照,測(cè)試反應(yīng)管可以有多個(gè)。配制過(guò)程中應(yīng)注意無(wú)菌,并注意避免操作產(chǎn)生的氣溶膠造成樣品間的交叉污染,推薦在有風(fēng)壓的設(shè)備如超凈臺(tái)或生物安全柜中進(jìn)行操作。建議配制完畢后瞬時(shí)離心以使液體沉至管底。 |